平面偏振光通過含有某些光學活性化合物的液體或溶液時,能引起旋光現象,使偏振光的平面向左或向右旋轉。旋轉的度數,稱為旋光度。在一定波長與溫度下,偏振光透過每1ml含有1g旋光性物質的溶液且光路為長1dm時,測得的旋光度稱為比旋度。上海佳航:AIpol-P630數字旋光度測定儀,比旋度(或旋光度)可以用于鑒別或檢查光學活性藥品的純雜程度,亦可用于測定光學活性藥品的含量。
在空間上不能重疊,互為鏡像關系的立體異構體稱為對映異構體。手性物質的對映異構體之間,除了使平面偏振光發生偏轉的程度相同而方向相反之外,在非手性環境中的理化性質相同。生物大分子如酶、生物受體等通常為手性物質,是表現出對一種對映體的立體選擇性,因此,對映異構體可在藥理學與毒理學方面有差異。來源于自然界的物質,例如氨基酸、蛋白質、生物堿、抗體、糖苷、糖等,大多以對映體的形式存在。外消旋體一般由等量的對映異構體構成,旋光度凈值為零,其物理性質也可能與其對映體不同。
*常用的光源是采用鈉燈在可見光區的D線(589.3nm),但也使用較短的波長,如光電偏振計使用濾光片得到汞燈波長約為578nm、546nm、436nm、405nm和365nm處的*透射率的單色光,其具有更高的靈敏度,可對更低濃度的待測化合物進行測定。還有一些其他光源,如帶有適當濾光器的氙燈或鹵鎢燈。
除另有規定外,本法系采用鈉光譜的D線(589.3nm)測定旋光度,測定管長度為1dm(如使用其他管長,應進行換算),測定溫度為20℃。用讀數至0.01°并經過的旋光計。
旋光度測定一般應在溶液配制后30分鐘內進行測定。測定旋光度時,將測定管用供試品溶液沖洗數次,緩緩注入供試品溶液適量(注意勿使發生氣泡),置于旋光計內檢測讀數,即得供試液的旋光度。使偏振光向右旋轉者(順時針方向)為右旋,以“+”符號表示;使偏振光向左旋轉者(反時針方向)為左旋,以“-”符號表示。用同法讀取旋光度3次,取3次的平均數,照下列公式計算,即得供試品的比旋度。
對液體供試品
對固體供試品
式中 [α]為比旋度;
D為鈉光譜的D線;
t為測定時的溫度,℃;
l為測定管長度,dm;
α為測得的旋光度;
d為液體的相對密度;
c為每100ml溶液中含有被測物質的重量(按干燥品或無水物計算),g。
旋光計的,可用標準石英旋光管進行,讀數誤差應符合規定。
【注意事項】
(1)每次測定前應以溶劑作空白校正,測定后,再校正1次,以確定在測定時零點有無變動;如第2次校正時發現旋光度差值過±0.01時表明零點有變動,則應重新測定旋光度。
(2)配制溶液及測定時,均應調節溫度至20.0℃±0.5℃(或各品種項下規定的溫度)。
(3)供試的液體或固體物質的溶液應充分溶解,供試液應澄清。
(4)物質的旋光度與測定光源、測定波長、溶劑、濃度和溫度等因素有關。因此,表示物質的旋光度時應注明測定條件。
(5)當已知供試品具有外消旋作用或旋光轉化現象,則應相應地采取措施,對樣品制備的時間以及將溶液裝入旋光管的間隔測定時間進行規定。
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